Настасьинский переулок располагается в Центральной части столицы, в Тверском районе. Переулок протянулся от Тверской улицы в северо-восточном направлении, проходит небольшое расстояние, заканчивается прилегая к улице Малая Дмитровка. Параллельно Настасьинскому переулку с южного направления расположена Пушкинская площадь, Большая Бронная улица и Страстной бульвар, с севера параллельно описываемому переулку пролегают Дегтярный и Стропименовский переулки.
Настасьинский переулок известен ещё с 18 века, в то время он носил другое название – назывался Княж-Настасьевским переулком, спустя некоторое время переулок стал называться Настасьинским. Название переулка связано с Настасьей, так звали жену домовладельца, чьи здания располагались на этом переулке. Хозяином недвижимости был князь Волконский, жена его соответственно была княгиня, из-за этого переулок назывался Княж-Настасьевский. А так же не долгий период времени, описываемый переулок назывался Медвежьим переулком.
Протяжённость Настьинского переулка насчитывает двести семьдесят метров, он пролегает вдоль жилого сектора Тверского района. На северо-западной стороне Настасьинского переулка находятся:
- Пятиэтажное административно-офисное здание старой застройки, в этом доме находятся: консультативный центр «Юридическая жизнь», уютная кофейня «Прайм стар», магазин фирменной одежды «Тру, Трусарди», кофейня «Кофе-хаус».
- Хранилище Центробанка РФ - старинное здание, с красивым фасадом, украшенными лепниной окнами. Ранее в этом доме находилось центральное хранилище государственного банка СССР, а так же в этом же здании находилась ссудная казна. Этот дом был построен в 1916-м году, является памятником архитектуры.
- Двух этажный особняк постройки середины 19-го века. На сегодняшний день здание пустует.
- Восьмиэтажный бизнес-центр класса «В», здание было построено в 2005 году, под зданием находится двухуровневый паркинг на 42 машины.
- Пятиэтажное здание, в котором находятся: ресторан «Фанни Кабани» и салон-магазин «На Малой Дмитровке».
На противоположной стороне Настасьинского переулка располагаются:
- Пятиэтажное старинное жилое здание, в котором располагаются: кофейня, кадровое агентство «Дружная семья», кафе «Фонтан», туристическая компания ООО «Солнце ТУР».
- Двухэтажное здание.
- Комплекс зданий ФГУП «Издательство «Известия»» - является объектом культурного наследия.
- Административно-офисное здание, редакция газеты «Труд», дом с горельефами на стене.
- Ресторан «Мама Зоя».
- Кинотеатр «Киномир».
- Бывший особняк, старинное здание.
Природных насаждений вдоль границ Настасьинского переулка очень мало, около зданий в центральной части переулка расположены небольшие островки природной растительности.
Автобусные остановки располагаются на Тверской улице, по которой курсируют троллейбусы №№ 12, 1 и автобусы №№ Н1, 12ц. Станция метро «Пушкинская» находится на расстоянии менее ста метров от западной части Настасьинского переулка.